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喹诺酮类药物（QNS）检测试剂盒使用说明书
产品名称
通用名称：喹诺酮类药物（QNS）检测试剂盒
英文名称：ELISA Kit to DetectQuinolones
产品编号：TH009-1
概要
喹诺酮类药物是一类十分重要的广谱抗生素，能抑制细菌DNA螺旋酶，具有高效、低毒、组织穿透力强等特点，已成为兽医临诊和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，被大量应用于动物疾病的预防和治疗。因为其耐药性和潜在的致癌性而引起广泛的关注。
本公司研发的喹诺酮类药物检测试剂盒是应用抗原、抗体特异性的免疫学原理而建立的一种敏感、特异、简便及快速的检测产品，适用于现场大批量样品检测。
包装规格
96T/盒
预期用途
适用于蜂蜜、水产品（鱼肉、虾肉）、动物组织(肌肉、肝脏等)以及纯牛奶样本中喹诺酮类药物残留量的定量检测。
测定原理
样品中的喹诺酮类药物与酶标板上固定的抗原特异性竞争抗体，加入酶结合物，与抗体反应，通过酶催化显色剂显色，根据显色的深浅来判断样品中喹诺酮类药物的含量。如果样品中的喹诺酮类药物量少，显色深，反之，则显色浅。检测时设置标准曲线，通过标准曲线测定样品中喹诺酮类药物的含量。
反应时间
样品处理时间：
1) 蜂蜜、水产品、动物组织……………….40分钟
2) 纯牛奶…………………………………… 5分钟
试剂盒反应时间……………………………. 75分钟
产品组成
1、喹诺酮类药物酶标板一块：96孔
2、喹诺酮类药物标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：
0ppb，1 ppb，3 ppb，9 ppb，27 ppb，81 ppb
3、喹诺酮类药物标准品（添加实验）：1瓶（1ml），1ppm
4、喹诺酮类药物抗体工作液：1瓶（7 ml），直接使用
5、喹诺酮类药物酶结合物：1瓶（13ml），直接使用
6、10×浓缩洗涤液：1瓶（50ml），用于洗板
7、底物液A：1瓶（7ml），过氧化脲
8、底物液B：1瓶（7ml），四甲基联苯胺
9、终止液：1瓶（7ml），2M硫酸
10、说明书一份
11、质检报告一份
12、盖板膜一张
使用单位需自备的设备及试剂
设备：
┅┅微孔板酶标仪(450nm/630nm)
┅┅均质器
┅┅氮气吹干仪或旋转蒸发器
┅┅振荡器
┅┅离心机
┅┅电子天平
┅┅刻度移液管（10ml）、洗耳球
┅┅微量移液器：单道20μl ~200μl、100μl~1000μl
多道50μl~300μl
试剂：
┅┅乙腈（分析纯）
┅┅无水甲醇（分析纯）
┅┅去离子水
溶液配制
1) 样品稀释液：
取150ml无水甲醇，加去离子水850ml，混匀。密封后可在2-8℃保存三个月。
2) 1×洗涤工作液：
取50ml 10×浓缩洗涤液，加去离子水450ml，混匀。可在2-8℃保存三个月。
待测样品处理方法
1、蜂蜜、鱼肉、虾肉、鸡肉、猪肉（稀释系数5）；
牛肉、猪肝、鸡肝（稀释系数10）：
1)除去肌肉、肝脏或者肾脏中的脂肪，使用均质器进行匀浆；
2) 称取1±0.01 g均质后的样品于50 ml离心管中；加入0.5 ml样品稀释液（见溶液配制1），充分振荡20秒；
3) 加入4.5ml乙腈，立即振荡5分钟至组织完全分散；4) 静置10分钟，取1ml上清于离心管中（若液体浑浊则4000g离心5分钟），50-60℃氮气吹干；
5) 加入1ml样品稀释液，低速振荡30秒；
6) 鱼肉、虾肉、鸡肉、猪肉和蜂蜜样品，直接取50µl上清进行检测；
牛肉、猪肝、鸡肝样品取200µl上清与200µl样品稀释液，充分振荡30秒后，取50µl进行检测。
2、纯牛奶（稀释系数10）：
1) 纯牛奶样品，充分平衡至室温(20-25℃)；
2) 取100µl于1.5ml离心管中，加入 900µl样品稀释液，充分振荡20秒；
3) 取50 µl进行检测。
注意事项
1) 使用前将试剂盒回升至室温（20-25℃）。
2) 严格按说明书操作，不得改变加样顺序及温育时间，
每加一种试剂前需将其摇匀。
3) 尽量缩短加样时间，加入相同试剂或样品时应使用多道微量移液器。
4) 洗板应保持一致性，不可更改冲洗次数。洗涤后，避免微孔干燥，否则可能会造成标准曲线不成线性或重复性不好的现象。
5) 若底物液B有任何颜色表明其变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂盒可能变质。
6) 若酶标板底部被污染，则在读数之前用软纸轻轻擦试微孔板底部，防止因污染而影响读数结果。
7) 在所有恒温孵育过程中，要避免光线照射，应用盖板膜盖住微孔板。
8) 没有用完的微孔板应存放回有干燥剂的密封袋内，2-8℃密封干燥保存，试剂盒避免冷冻。
9) 不要使用过期的试剂盒及各组份，不要同时使用不同批号试剂盒中的试剂。
酶免分析步骤
1、将标准品和样品对应的微孔编号，每个标准品和样品做双孔平行，并记录标准品和样品的位置。
2、在标准品孔中加入50µl各标准品溶液，在各样品孔中加入50µl样品溶液。
3、在所有孔中加入50µl的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光反应30分钟。
4、小心揭开盖板膜，甩干孔中液体，用稀释好的洗涤工作液（250μl/孔）充分洗涤微孔板3次，在吸水纸上拍干（拍干后未清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
5、在所有孔中加入100µl的酶结合物，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光反应30分钟。取出酶标板，按步骤4洗板5次。
6、洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl底物液A，再加 50µl底物液B，轻微晃动反应板使之彻底混匀，25℃环境避光显色15分钟 (在颜色浅的情况下可适当延长反应时间，但总显色时间不要超过30分钟)。
7、每孔中加入50µl终止液，轻轻晃动使之彻底混匀，在450nm（建议使用双波长450/630nm）下检测吸光度，结果在5分钟内读取。
结果计算
1、所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以，即百分吸光度值。
2、以标准品浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为喹诺酮类药物浓度的对数值，求得反对数即为测定液中喹诺酮类药物浓度C（ng/ml）。样本经过稀释时应乘以相应稀释系数。
样品检测下限
蜂蜜、鱼肉、虾肉、鸡肉、猪肉：
环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星…………约5 ppb
诺氟沙星、盐酸沙拉沙星…………………约2.5 ppb
甲磺酸达氟沙星……………………………约12.5 ppb
甲磺酸培氟沙星……………………………约16 ppb
盐酸双氟沙星………………………………约25 ppb
牛肉、猪肝、鸡肝：
环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星…………约10 ppb
诺氟沙星、盐酸沙拉沙星…………………约5 ppb
甲磺酸达氟沙星……………………………约25 ppb
甲磺酸培氟沙星……………………………约32 ppb
盐酸双氟沙星………………………………约50 ppb
纯牛奶：
环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星………约10ppb
诺氟沙星、盐酸沙拉沙星………………约5 ppb
甲磺酸达氟沙星…………………………约25 ppb
甲磺酸培氟沙星…………………………约32 ppb
盐酸双氟沙星……………………………约50 ppb
交叉反应(特异性)
环丙沙星…………………………
恩诺沙星…………………………
诺氟沙星…………………………200%
氧氟沙星…………………………
盐酸双氟沙星……………………20%
盐酸沙拉沙星……………………200%
甲磺酸达氟沙星…………………40%
甲磺酸培氟沙星…………………33%
准确度（回收率）
鱼肉、虾肉、鸡肉、猪肉和蜂蜜………90±15%
牛肉、猪肝、鸡肝………………………90±20%
纯牛奶……………………………………80±20%
精确度
试剂盒板内变异系数小于8%，板间变异系数小于10%。
贮藏条件及保存期
产品保存于2-8℃，自生产日期起12个月内有效。